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RAGE基因在胃癌中的表达及临床意义
发布时间:2015-10-08 14:47 作者: 阅读次数: 文章出自:


RAGE基因在胃癌中的表达及临床意义

姚壮凯 鲁凯 叶红玲 邓建武 刘慧敏 吕三云

【摘要】 目的:探讨胃癌组织中RAGE基因表达情况及其临床意义。方法 :对100例胃癌及对照组蜡快标本,运用Real-time PCR技术检测RAGE基因表达情况,并分析基因表达与胃癌组织临床病理特征关系。结果:RAGE基因表达荧光实时定量PCR法上调为70%,淋巴结转移、分化程度,浸润深度与基因高表达有密切关系,而与年龄、性别、肿块直径及胃癌TNM分期无关。结论:RAGE基因表达对于胃癌早期诊断和预后分析有重要指导意义,据其表达开展有选择性地基因治疗应有一个良好的应用前景。

【关键词】  胃癌; RAGE淋巴结转移;Real-time PCR 

Expression of RAGE Gene in Human Gastric Carcinoma and Its Clinical Significance

Yao Zhuangkai, Lu Kai,Ye Hongling, Deng Jianwu,Liu Huimin Lv Sanyun

Department of general surgery, Lianyungang Second People’s Hospital, Lianyungang, 222023, China

Abstract Objective: To investigate the expression of RAGE gene in human gastric carcinoma and clinical significance.Methods: Real-time PCR technology was conducted to detect the expression of RAGE gene in 100 gastric carcinomas tissue, and the corresponding adjacent normal gastric tissues. The relationships of these expressions to several factors such as differentiation degree, invasion, lymph node metastasis and TNM stage of cancer were explored. Results: The positive expression rate of RAGE gene was 70.0% in gastric carcinoma tissues. The overexpression of RAGE gene was positively correlated with tissue differentiation and  invasion stage ,also as lymph node metastasis. and there was no relationship with sex,age TNM stage and tumor size, Conclusion: Overexpression of RAGE gene in human gastric carcinoma can be used as one of the parameters for determining early diagnosis and prognosis. Selective gene therapy based on these gene expressions may be useful.

Keywords :Gastric carcinoma; Advanced glycosylation end-product (RAGE); Lymph node metastasis; Real-time PCR

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一。胃癌的死亡原因主要是转移和复发,探讨转移和复发机制,了解其转移和复发倾向,对于胃癌患者的有效治疗和提高生存率有非常重要的意义,近年来发现RAGE在许多恶性肿瘤中表达增高,并且与肿瘤细胞的增殖、运动、侵袭转移能力及肿瘤临床分期、预后等密切相关,本研究采用Real-time PCR技术检测了100例胃癌及癌旁对照组织蜡快标本中RAGE的基因表达情况,现将结果报告如下:

对象与方法

1研究对象

选择我院2008年09月至2011年09月手术切除并经病理证实、资料完整的胃癌患者100例,所有患者术前未接受放疗和化疗,男性75例,女性25。年龄32-79岁,中位年龄62岁。根据新编常见恶性肿瘤规范对所有病例按分化程度、TNM分期等进行分类,其中16例,34例,46例,4例。有淋巴结转移65例,无淋巴结转移35例。高分化腺癌8例,中分化腺癌32例,低分化腺癌60例。另取上述患者的癌旁正常胃组织(﹥5cm)作为对照组。

1方法

1.2.1基因组RNA抽取

按照试剂盒说明提取石蜡RNA(RNase-free FFRE Kit, Qiagen) ,取5ul RNA加60ul RNase Free ddH2O,在eppendorf紫外分光光度仪上测定RNA的A260和A280,计算RNA的溶度。定量PCR反应体系: 2.5ul,模板cDNA 1ul,上下游引物各0.25ul(20pmol/ul),H2O 1ul,(5ul体系)。反应条件:预热2min, 94 ℃3 min, 94 ℃ 30 s,52 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,35个循环。终末延伸72 ℃ 10min。

1.2.2引物的设计和合成

参照H Ishiguro[2]报道的人RAGE基因cDNA设计引物如下,引物合成由上海生工公司完成,?-actin 基因(管家基因)为内参基因。RAGE: 上游引物:5'-GGG GTA CCA AGG AAG CAG GTA GGCAGCC-3'  下游引物:5'-CCG CTCGAATCCATTCCTGTTCATCTG C-3',扩增片段220bp;?-actin:上游引物:5-‘2TGGCACCCAGCACAATGAA2-3’ 下游引物:5-‘2CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA 2-3’ 扩增片段250bp。

1.2.3荧光实时定量PCR数据分析  

设定基线,以空白管不出现阳性为准,利用待测样本的Ct值(3 个复管的平均值) 求出相应的基因拷贝数作为检测结果,根据PCR反应曲线获得样本的Ct值(threshold cycle)作为评估基因表达量的指标。Ct值越大,基因表达量就越小。以β-actin作为内参照,ΔCt=目的基因Ct值/β-actin Ct值。

13 统计学处理

应用SPSS13.0统计软件包,相对表达含量以x±S表示。计量资料的比较采用方差检验,检验水准:a=0.05。

结果

2.1每次实时定量PCR反应结束后,可得到扩增样本的定量曲线。表1为RAGE定量曲线,直线为基线,各样本在基线以上呈指数扩增,扩增曲线与基线的交点为改样本的Ct值,代表起始拷贝数。

表1:RAGE实时定量PCR产物的定量曲线



2.2 胃癌组织中有70例RAGE表达上调,占70%相对应的癌旁组织表达上调率14%,具有显著性差异(P<0.05),胃癌组织中50例,表达上调29例,占58%50例,表达上调41例,占82%。两组表达上调率差异具有统计学意义(p= 0.009);无淋巴结转移35例,表达上调19例,占54.29%,有淋巴结转移65例,表达上调51例,占78.46%。两组表达上调率差异有统计学意义(p=0.012 。RAGE表达上调与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分期未见明显相关,而与肿瘤浸润深度及组织分化程度、淋巴结情况密切相关。

表2:RAGE与胃癌的临床病理特征关系

临床病理特征

例数

RAGE

 

+        

 

P

年龄

<60岁

60岁

 

43

57

 

36       7

34       23

 

 

0.463

性别

 

75

25

 

58       17

12       13

 

 

0.341

肿瘤直径

<5cm

5cm

 

56

44

 

44       12

26       18

 

 

0.702

分化程度

中高分化

低分化

 

60

40

 

39      21

31       9

 

 

0.028

肿瘤分期

Ⅰ+Ⅱ

Ⅲ+Ⅳ

 

50

50

 

29       21

41       9

 

 

0.401

浸润程度

未达浆膜层

浆膜层及以外

 

62

38

 

43       19

27       11

 

 

0.001

淋巴结情况

 

65

35

 

51       14

19       16

 

 

0.047


讨论

高级糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation end products. RAGE)最早是在研究糖尿病中发现,人RGAE基因位于6号染色体短臂2型与3型主要组织相容性复合物(MHc)基因之间,共含有11个外显子,随着对RAGE的认识不断深入,其在糖尿病并发症、神经系统疾病、炎症透析相关疾病及心血管疾病等领域获研究得了较大的突破。近年研究发现,RAGE在许多恶性肿瘤中表达增高,并且与肿瘤细胞的增殖、运动、侵袭转移能力及肿瘤临床分期、预后等密切相关[1-4]

目前在胃癌、结肠直癌、胰腺癌等恶性肿瘤的研究中发现RAGE的表达与肿瘤的侵袭深度及淋巴结转移密切相关。HKuniyasu [3]等对96例胃癌组织进行免疫组织化学方法检测,发现其中62例RAGE表达阳性(65%),尤其是在低分化腺癌中高表达(90%),RAGE强烈的免疫反应性同样也与侵袭深度和淋巴结转移相关联,RAGE阳性细胞是原发性胃癌扩散的先锋,在所有的淋巴结转移灶中都可检测到它,TaKaDa[4]等RAGE在胰腺癌中侵袭及表达情况进行了观察,他们对3种有不同潜在转移能力的胰腺癌细胞进行试验,发现胰腺癌的组织学类型与RAGE的表达有显著相关性,分化程度高的RAGE蛋白表达相对较少。对本研究结果显示,胃癌组织中RAGE基因表达荧光实时定量PCR法上调为70%。其中中高分化程度中RAGE表达上调率65%,低于低分化程度的77.5%,由此提示RAGE基因表达阳性率与胃癌的侵袭和转移密切相关,这与上述相关报道相一致。

总之,在胃癌组织中,RAGE基因的特异性高表达,并且有淋巴结转移的胃癌组织中RAGE基因表达显著高于无淋巴结转移的胃癌组织。说明RAGE基因在癌细胞的生长和增殖过程中起着广泛的促进作用。检测胃癌组织中RAGE基因表达对于早期诊断和预后分析有指导意义,根据其表达情况开展有选择性地针对RAGE基因的治疗或许可成为肿瘤治疗的一种方法。

参考文献:

[1] H Kuniyasu, N Oue, A Wakikawa, et al. Expression of receptors for advanced glycationend-prducts(RAGE) is closely associated with the invasive and metastatic activity of gastric cancer[J]. Pathol, 2002, 196(2): 163-170.

[2] H Ishiguro, N Nakaigawa, Y Miyoshi, et al. Receptor for advanced glycation end products(RAGE)and its ligand, amphotefin are overexpressed and associated with prostate cancer development[J]. Prostate, 2005, 64(1): 92-100.

[3] H Kuniyasu, Y Chijhara, T Takahashi.Co-expression of receptor for advanced glycation end products and the ligand amphoterin associates closely with metastasis of colorectal cancer[J]. Oncol Rep, 2003, 10(2): 445-448.

[4]M Takada, K Hirata, T Aiiki, et al. Expression of receptor for advanced glycation end products(RAGE) and MMp-9 in human pancreation cancer cells[J]. Hepatogastroenterology, 2004, 51(58): 928-930.

[5] A Taguchi , DC Blood , G del Toro , et al. Blockage of  RAGE-amphoterin signaling suppresses tumour growth and metastasis[J]. Nature ,2000, 405(6784): 351-360.










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